La Basilique Notre-Dame de Guanajuato est la cathédrale principale de la ville, construite entre 1671 et 1696. Elle abrite une statue en bois ornée de bijoux de la Vierge datant supposément du VIIe siècle, ce qui en fait la plus ancienne œuvre d'art chrétien du Mexique. La cathédrale est dédiée à la sainte patronne et protectrice de la ville. Le bâtiment possède un orgue à tuyaux baroque français avec 1 098 tuyaux